1. 知识产权保护：包括审查被调查国是否提供了充分有效的知识产权保护，是否存在大规模盗版、假冒商品生产和销售，以及未经授权使用美国公司的专利、商标、版权和技术秘密等问题。

2. 技术转让和商业规定：调查是否存在强制性技术转让要求，即外国政府是否通过法规、行政命令或其它方式，迫使美国企业在进入当地市场、获取许可或进行投资时必须转让其核心技术。

3. 市场准入壁垒：审查被调查国是否对美国产品和服务设置了不合理的市场准入门槛，包括关税壁垒、非关税壁垒（如繁复的技术标准、检验检疫规定、行政许可制度等）、服务贸易限制（如数据流动限制、外国股权上限等）。

4. 补贴行为：调查被调查国政府是否对其国内企业提供非法补贴，包括财政补贴、税收优惠、廉价贷款以及其他形式的支持，导致美国企业在国际市场上的竞争力受损。

5.竞争中立性：审查国有企业在市场中的行为是否具有竞争优势，是否得到不公平的政府支持，进而影响到美国企业的公平竞争环境。

6. 数字贸易和电子商务：随着数字经济的发展，301调查也可能涵盖数据本地化存储要求、跨境数据传输限制、网络审查、在线平台的市场准入和运营规则等方面的问题。

7. 劳工权益：调查外国企业是否遵守国际劳工标准，是否存在压低劳动力成本、剥削劳工、禁止集体谈判权等违反劳工权益的行为，这些因素可能间接影响到美国企业的竞争力。

8. 环境标准：虽然这不是301调查的传统焦点，但在某些情况下，可能会考察被调查国的环境标准和执行情况，若其低于国际水平且形成对美国企业的不公平竞争条件，则可能成为调查内容之一。

9. 透明度和法治：审查被调查国的法律法规制定和执行过程是否公开透明，是否有明确、稳定和公正的法律框架，以及是否存在随意执法、行政干预过度等问题。

10. 投资环境：审查外国的投资环境是否公平对待美国投资者，是否存在歧视性的外资准入政策、强制合资要求、技术转让条件，以及在投资后阶段的资产处置、利润汇出等方面存在的问题。

11. 行业特定问题：301调查可能会针对某一特定行业或领域的贸易问题进行深入研究，例如高新技术产业、农业、汽车制造业、能源、电信等领域。

12. 国家主导的战略：审查被调查国是否实施了具有战略意图的贸易和产业政策，例如“中国制造2025”、“工业4.0”等战略计划，是否对美国相关产业造成冲击或威胁。